DESCRIÇÃO

Um dos últimos passos na apoptose é a fragmentação do DNA, um processo que resulta da ativação de endonucleases durante o programa apoptótico. Estas nucleases degradam a estrutura de cromatina de ordem superior em fragmentos de ~ 300 kb e subsequentemente em pedaços de DNA menores com cerca de 50 pb de comprimento. Um método que é frequentemente utilizado para detectar ADN fragmentado utiliza uma reacção catalisada por TdT exógena, muitas vezes referida como “marcação final” ou “TUNEL” (marcação terminal de nick de desoxinucleotidiltransferase dUTP). O ensaio APO-DIRECT ™ (Ref. 6536KK) é um método de etapa única para rotular as quebras de DNA com FITC-dUTP, seguido por análise por citometria de fluxo. No ensaio APO-BRDU ™, a TdT catalisa uma adição independente de modelo de trifosfatos de desoxiuridina bromolados (Br-dUTP) aos 3 ‘ -hidroxil (OH) terminais de ADN de cadeia dupla e simples. Ap� incorpora�o, estes locais s� identificados por meio de citometria de fluxo por colora�o das c�ulas com um mAb anti-BrdU marcado com FITC.

O APO-DIRECT ™ é um método de coloração de etapa única para rotular as quebras de DNA para detectar células apoptóticas por citometria de fluxo. Reagentes suficientes são fornecidos para processar 50 testes. O kit inclui 5 ml de suspensões de células de controlo positivas e 5 ml de controlo negativo, aproximadamente 1 x 10 células por ml em etanol a 70% (v / v). As células de controlo são derivadas de uma linha celular de linfoma humano e foram fixadas como descrito abaixo no Protocolo de Fixação.

O Kit APO-DIRECT ™ consiste em duas partes (parte A e B).

Parte A (Comp. No. 51-6536AK) consiste em:

Um frasco de 25 ml de tampão de coloração PI / RNase (5 µg / ml, 200 µg / ml de RNase) [Comp. No. 51-6551AZ],

Um frasco de 0,5 ml de Reaction Buffer (contendo ácido cacodílico (dimetilarsênico)) [Comp. No. 51-6549AZ],

Um frasco de 100 ml de tampão de enxaguamento (contendo 0,05% de azida de sódio) [Comp. No. 51-6550AZ]

Um frasco de 100 ml de tampão de lavagem (contendo 0,05% de azida de sódio) [Comp. No. 51-6548AZ].

Parte B (Comp. No. 51-6536BK) consiste em:

Um frasco de 0,4 ml de FITC-dUTP (0,25 nMol) [Comp. No. 51-6555EZ]

Um frasco de 5 ml de Células de Controlo Negativo [contém 70% (v / v) de etanol] [Comp. No. 51-6553LZ]

Um frasco de 5 ml de Células de Controlo Positivo [contém 70% (v / v) de etanol] [Comp. No. 51-6552LZ]

Um frasco de 0,038 mL de Enzima TdT [200 µg / mL (SA = 100.000 U / mg) em solução de glicerol a 50% (v / v); não congelará a -20 ° C] [Comp. No. 51-6554EZ].