Descrição

Informação do produto
Número de material: 556547
Componente: 51-66121E
Descrição: Buffer de Ligação 10X Annexin V
Tamanho: 50 ml (1 cada)
Tampão de Armazenamento: Solução tamponada aquosa sem conservante.
Componente: 51-65874X
Descrição: FITC Annexin V
Tamanho: 0,5 ml (1 cada)
Vol. por teste: 5 µl
Tampão de Armazenamento: Solução tamponada aquosa contendo BSA e ≤ 0,09% de azida sódica.
Componente: 51-66211E
Descrição: Solução de coloração de iodeto de propídio
Tamanho: 2,0 ml (1 cada)
Vol. por teste: 5 µl
Tampão de Armazenamento: Solução tamponada aquosa sem conservante.
Descrição:
A apoptose é um processo fisiológico normal que ocorre durante o desenvolvimento embrionário, bem como na manutenção da homeostase tecidual. O programa apoptótico é caracterizado por certas características morfológicas, incluindo a perda da assimetria e fixação da membrana plasmática,
condensação do citoplasma e núcleo, e clivagem internucleossômica do DNA. Perda de membrana plasmática é uma das primeiras características.
Em células apoptóticas, a membrana fosfolipídica fosfatidilserina (PS) é translocada do folheto interno para o externo do plasma membrana, expondo assim o PS ao ambiente celular externo. A anexina V é uma ligação de fosfolipídios dependente de Ca2 + de 35-36 kDa proteína que tem alta afinidade por PS, e se liga a células com PS exposta. A anexina V pode ser conjugada a fluorocromos, incluindo FITC.
Este formato mantém sua alta afinidade por PS e, portanto, serve como uma sonda sensível para análise citométrica de fluxo de células que estão sendo submetidas apoptose. Como a externalização da PS ocorre nos estágios iniciais da apoptose, a coloração com Anexina V na FITC pode identificar a apoptose em estágio do que ensaios baseados em alterações nucleares, como a fragmentação do DNA.
FITC A coloração com Anexina V precede a perda de integridade da membrana que acompanha os últimos estágios de morte celular
processos apoptóticos ou necróticos. Portanto, a coloração com FITC Annexin V é tipicamente usado em conjunto com um corante vital como o propídio.
Iodeto (PI) ou 7-Amino-Actinomicina (7-AAD) para permitir que o investigador identifique células apoptóticas precoces (PI negativo, FITC Annexin V
positivo). Células viáveis ​​com membranas íntegras excluem o PI, onde as membranas de células mortas e danificadas são permeáveis ​​ao IP. Por exemplo, as células que são consideradas viáveis ​​são FITC Annexin V e PI negative; células que estão em apoptose precoce são FITC Annexin V positivo e PI negativo; e as células que estão em apoptose tardia ou já mortas são ambas FITC Annexin V e PI positive. Este ensaio não distingue
entre células que sofreram morte apoptótica versus aquelas que morreram como resultado de uma via necrótica, porque em ambos os casos, os mortos as células irão corar com ambas as Anexinas V e PI da FITC. No entanto, quando a apoptose é medida ao longo do tempo, as células podem ser frequentemente rastreadas a partir do FITC Anexina V e PI negativo (apoptose viável ou não mensurável), a FITC Anexina V positiva e PI negativa (apoptose precoce, membrana a integridade está presente) e, finalmente, a FITC Annexin V e PI positive (apoptose em fase final e morte). O movimento das células através destes três estágios sugere apoptose. Em contraste, uma única observação indicando que as células são ambas FITC Annexin V e PI positivo, em si, revela menos informação sobre o processo pelo qual as células sofreram sua morte.