APC BrdU Flow Kit
APC BrdU Flow Kit
Descrição
DESCRIÇÃO
A colorao imunofluorescente de bromodesoxiuridina incorporada (BrdU) e a anise citomtrica de fluxo proporcionam uma tnica de alta resoluo para determinar a frequcia e natureza de culas individuais que possuem ADN sintetizado. Neste método, BrdU (um análogo do precursor de DNA timidina) é incorporado no DNA recém-sintetizado pelas células que entram e progridem através da fase S (síntese de DNA) do ciclo celular. A BrdU incorporada é corada com anticorpos fluorescentes específicos anti-BrdU . Os níveis de BrdU associados às células são então medidos por citometria de fluxo. Muitas vezes, a coloração com um corante que se liga ao DNA total, tal como 7-amino-actinomicina D (7-AAD) é acoplada com coloração com BrdU imunofluorescente. Com esta combinação,
| Reagente | Quantidade |
| Anticorpo anti-BrdU conjugado a fluorocromo | Um frasco de 65 µL |
| BD Cytofix / Cytoperm ™ Buffer | Uma garrafa de 25 ml |
| BD Perm / Wash ™ Buffer (10X) | Dois frascos de 25 ml |
| BD Cytoperm ™ Permeabilization Buffer Plus | Uma garrafa de 10 ml |
| 7-AAD | Um frasco de 1 mL |
| BrdU (10 mg / mL) | Cinco frascos de 0,5 mL |
| DNase | Cinco frascos de 300 µL |
PREPARAÇÃO E ARMAZENAMENTO
Anticorpo, tampões e 7-AAD.
Armazenar o anticorpo anti-BrdU conjugado com fluorocromo, tampão BD Cytofix / Cytoperm, tampão BD Perm / Wash, tampão de permeabilização BD Cytoperm Plus e 7-AAD entre 2 e 8 ° C. Manter o anticorpo anti-BrdU conjugado com fluorocromo e o 7-AAD protegido da luz.
As porções não utilizadas do tampão 1X BD Cytofix / Cytoperm podem ser armazenadas entre 2 e 8 ° C.
BrdU e DNase.
Armazene o BrdU e a DNase a –80 ° C.
A solução de BrdU mostrou-se estável por até 4 meses entre 2 e 8 ° C, ou pode ser congelada novamente. Evite vários ciclos de congelamento e descongelamento.
A solução estoque de DNase (1 mg / mL) pode ser congelada novamente uma vez antes de perder a atividade.
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