Descrição

DESCRIÇÃO

Um dos últimos passos na apoptose é a fragmentação do DNA, um processo que resulta da ativação de endonucleases durante o programa apoptótico. Estas nucleases degradam a estrutura de cromatina de ordem superior em fragmentos de ~ 300 kb e subsequentemente em pedaços de DNA mais pequenos com um comprimento de cerca de 50 pb. Um método que é frequentemente utilizado para detectar ADN fragmentado utiliza uma reacção catalisada por TdT exógena, muitas vezes referida como “marcação final” ou “TUNEL” (marcação terminal de nick de desoxinucleotidiltransferase dUTP).No ensaio APO-BRDU ™, a TdT catalisa uma adição independente de modelo de trifosfatos de desoxiuridina bromolados (Br-dUTP) ao terminal 3 ‘-hidroxilo (OH) de ADN de cadeia dupla e simples. Ap� incorpora�o, estes locais s� identificados por meio de citometria de fluxo por colora�o das c�ulas com um mAb anti-BrdU marcado com FITC.

O kit APO-BRDU ™ é um método de coloração de duas cores para rotular as quebras de DNA e o DNA celular total para detectar células apoptóticas por citometria de fluxo. Reagentes suficientes são fornecidos para processar 60 suspensões de células. O kit inclui 5 ml de suspensões de células de controlo positivas e 5 ml de controlo negativo, aproximadamente 1 x 10 células por ml em etanol a 70% (v / v). As células de controlo são derivadas de uma linha celular de linfoma humano e foram fixadas como descrito no Protocolo de Fixação.

O Kit APO-BRDU ™ consiste em duas partes (parte A e B).

Parte A (Comp. No. 51-6576AK) consiste em:

Um frasco de 0,30 ml de mAb anti-BrdU marcado com FITC [Isotipo: ratinho; 1 µg / teste (contém 0,05% de azida sódica)] (Comp. No. 51-6584AZ]

Um frasco de 30 ml de tampão de coloração PI / RNase (5 µg / ml, 200 µg / ml de RNase) [Comp. No. 51-6585AZ]

Um frasco de 0,6 ml de Reaction Buffer (contendo ácido cacodílico (dimetilarsênico)) [Comp. No. 51-6580AZ]

Um frasco de 126 ml de tampão de enxaguamento (contendo 0,05% de azida de sódio) [Comp. No. 51-6583AZ]

Um frasco de 120 ml de tampão de lavagem (contendo 0,05% de azida de sódio) [Comp. No. 51-6579AZ].

Parte B (Comp. No. 51-6576BK) consiste em:

Um frasco de 0,48 ml de Br-dUTP (54,7 µg / ml) [Comp. No. 51-6582EZ]

Um frasco de 5 ml de Células de Controlo Negativo [contém 70% (v / v) de etanol] [Comp. No. 51-6578LZ]

Um frasco de 5 ml de Células de Controlo Positivo [contém 70% (v / v) de etanol] [Comp. No. 51-6577LZ}

Um frasco de 0,045 mL de Enzima TdT [200 / mL (SA = 100 000 U / mg) em soluo de glicerol a 50% (v / v); não congelará a -20 ° C] [Comp. No. 51-6581EZ].